A specific, sensitive, simplified and fast LC– MS/MS method for plasma Lyso-GB3 levels


CANBAY E. , SEZER E. , KALKAN YILDIRIM H., ÇOKER M. , YILDIRIM SÖZMEN E.

44th FEBS Congress, Krakow, Polonya, 6 - 11 Temmuz 2019, cilt.9, no.9, ss.65-431

  • Cilt numarası: 9
  • Doi Numarası: 10.1002/2211-5463.12675
  • Basıldığı Şehir: Krakow
  • Basıldığı Ülke: Polonya
  • Sayfa Sayısı: ss.65-431

Özet

Fabry disease is an X linked hereditary metabolic disease that causes renal failure and many life­threatening complications as a result of alpha­galactosidase deficiency. The enzymatic deficiency causes to the  lysosomal accumulation of globotriaosylceramide (Gb3), and the deacylated derivative of Gb3, globotriaosyl­sphingosine (LysoGb3). Therefore,  the measurement of plasma LysoGb3 has become an important biomarker for diagnosis  and as a therapeutic monitoring of enzyme replacement therapy.  In this study we aimed to develop a simple, fast, cheap, underivatized LC MS MS method for measurement of plasma Lyso­GB3 levels. The chromatographic separation was operated on an Acquity UPLC C18  (50 mm × 2.1 mm, 1.7 μm) with gradient elution using %98 ­%2 Water/Methanol containing 0.05% formic acid and methanol  as the mobile phase at the flow rate of 0.4 ml/min and total run time was only  3 minutes. The mass quantification was carried on the multiple reaction monitoring (MRM) of the transitions of m/z 786.2 → 282.1 for Lyso­GB3 and m/z 624.2 → 282.1 for Lyso­GB2 (the internal standard), respectively. First of all we investigated the effect of liquid­liquid extraction solvents in terms of peak shape, peak response, matrix effect and recovery. In the scope of method validation parameters, selectivity,  linearity, determination and quantitation limits, carryover effect, reproducibility, recovery, matrix effect, reference range verification and stability studies were carried out. The limit of detection was found as 0.0018 ng/ml and the limit of quantification was found as 0.0053 ng/ml. The intraday  and inter­day reproducibility studies are below 7% which is suitable for validation criteria. Recovery rate was found as 96­102 % while matrix effect was found as 98­103%. At last,the validated method was successfully performed in 12 Fabry patients and 80 healthy individuals.